目的探讨携带凋亡素基因的重组腺相关病毒构建方法,观察其体外抑制膀胱癌的效应。方法构建重组质粒pAAV-VP3,经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切鉴定和基因测序无误后,采用三质粒共转染法包装重组腺相关病毒rAAV-VP3。收获病毒后聚合酶链反应(PCR)扩增病毒液中的目的基因鉴定重组病毒,对其进行纯化后透射电镜观察病毒颗粒,并检测病毒滴度。按每个细胞5×10~5个载体基因组的剂量感染EJ细胞后,逆转录(RT)-PCR检测VP3基因在EJ细胞中的转录,Western blot法检测凋亡素蛋白的表达。透射电镜扫描观察感染重组病毒后肿瘤细胞的超微结构变化,流式细胞术(FCM)检测重组病毒对EJ细胞的影响。结...