目的：探讨臭灵丹、石榴皮、蒲公英对幽门螺杆菌(H.pylori)甲硝唑耐药株及敏感株的体外抑制作用，筛选三种天然药物的最佳联合抑菌方案；观察天然药物组合对感染H.pylori的BALB/c小鼠的治疗作用。 方法：(1)琼脂稀释法检测H.pylori甲硝唑耐药株和敏感株对臭灵丹水煎剂、石榴皮水煎剂、蒲公英水煎剂的最低抑菌浓度(MIC)，并计算MIC5o、MIC75、MIC90；(2)正交设计筛选出抗H.pylori甲硝唑耐药株和敏感株的最佳天然药物组合；(3)选择云南菌株1-139(H.pylori甲硝唑耐药株)、4-145(H.pylori甲硝唑敏感株)感染BALB/c小鼠，建立动物模型；(4)最佳天然药物组合方案治疗H.pylori感染的BALB/c小鼠，观察疗效。 结果：(1)臭灵丹对H.pylori的MIC值范围为0.003125～0.2g/ml，H.pylori甲硝唑耐药株和敏感株对臭灵丹水煎剂的敏感性无统计学差异(相对中位数潜力1.1338，95％的可信区间为0.6083l～2.41187)，MIC50分别为0.045g/ml和0.043g/ml，MIC75分别为0.117g/ml和0.091g/ml，MIC90分别为0.278g/ml和0.179g/ml；石榴皮对H.pylori的MIC值范围为0.00390625～0.5g/ml，H.pylori甲硝唑耐药株和敏感株对石榴皮水煎剂的敏感性无统计学差异(相对中位数潜力1.0275，95％的可信区间为0.38659～3.01571)，MIC50分别为0.099g/ml和0.095g/ml，MIC75分别为0.327g/ml和0.348g/ml，MIC90分别为0.960g/ml和1.116g/ml；蒲公英对H.pylori的MIC值范围为0.00625～0.8g/ml，H.pylori甲硝唑耐药株和敏感株对蒲公英水煎剂的敏感性无统计学差异(相对中位数潜力1.0890，95％的可信区间为0.53850～2.45446)，MIC50分别为0.137g/ml和0.136g/ml，MIC75分别为0.426g/ml和0.460g/ml，MIC90分别为1.184g/ml和1.372g/ml。(2)三种天然药物对H.pylori甲硝唑敏感株最佳组合方案为：臭灵丹(0.278g/ml)：石榴皮(0.960g/ml)：蒲公英(0.137g/ml)；三种药物对H.pylori甲硝唑耐药株的最佳组合方案为：臭灵丹(0.179g/ml)：石榴皮(1.116g/ml)：蒲公英(0.460g/ml)。(3)采用云南菌株1-139、4-145通过手术方法成功建立BALB/c小鼠H.pylori耐药株和敏感株感染模型，4周后耐药株感染组模型感染率为90％(9/10)，敏感株感染组模型感染率为80％(8/10)，总感染率为85％(17/20)；8周后耐药株感染组模型感染率为100％(10/10)，敏感株感染组模型感染率为100％(10/10)，总感染率为100％(20/20)。(4)最佳天然药物组合方案治疗4周后，在甲硝唑耐药组中：天然药物(臭灵丹+石榴皮+蒲公英)、天然药物+铋二联(胶体次枸橼酸铋+四环素)、铋三联(胶体次枸酸铋+四环素+甲硝唑)的根除率分别为60％、86.7％、40％，甲硝唑耐药组天然药物+铋二联的根除率高于铋三联(胶体次枸酸铋+四环素+甲硝唑)，差异有统计学意义(P＜0.05)；天然药物与铋三联的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)；天然药物(60％)与天然药物+铋二联的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)。甲硝唑敏感组：天然药物(臭灵丹+石榴皮+蒲公英)、天然药物+铋二联(胶体次枸橼酸铋+四环素)、铋三联(胶体次枸酸铋+四环素+甲硝唑)的根除率分别为66.7％、80％、86.7％；铋三联与天然药物+铋二联的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)；天然药物与铋三联的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)；天然药物与天然药物+铋二联的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)。铋三联、天然药物和天然药物+铋二联在不同组中的比较：铋三联在甲硝唑敏感组中的根除率高于耐药组，差异有统计学意义(P＜0.05)；天然药物在甲硝唑耐药组与敏感组中的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)；天然药物+铋二联在甲硝唑耐药组与敏感组中的根除率相比，无统计学差异(P＞0.05)。 结论：(1)本研究发现臭灵丹、石榴皮、蒲公英对H.pylori甲硝唑耐药株及敏感株均有良好的抑菌效果。三种天然药物各自单独作用时，H.pylori甲硝唑耐药株及敏感株都对其敏感。(2)正交设计方法筛选出了三种天然药物对H.pylori甲硝唑敏感株和H.pylori甲硝唑耐药株的最佳配比组合分别为臭灵丹(MIC900.278g/ml)：石榴皮(MIC900.960g/ml)：蒲公英(MIC500.137g/ml)和臭灵丹(MIC900.179g/ml)：石榴皮(MIC901.116g/ml)：蒲公英(MIC750.460g/ml)。该方法提高了实验效率，节约科研资源。(3)采用云南菌株1-139、4-145通过手术方法成功建立BALB/c小鼠H.pylori耐药株和敏感株感染模型。CagA和VagA均为阳性的云南株1-139、4-145易于定植，可推广应用于BALB/c小鼠感染动物模型的实验研究。改良的手术接种方法种植率高，节省菌量、稳定性好。PCR-RFLP是鉴定动物模型中H.pylori定植的最特异的一种方法。(4)本研究体内动物实验发现铋三联在甲硝唑敏感组中的根除率明显高于耐药组；三种天然药物的最佳配比组合+铋二联的根除率在治疗H.pylori甲硝唑耐药株感染的动物时明显优于铋三联。(5)三种天然药物在我国分布极广、资源极为丰富、价格低廉，而且无耐药性、无毒副作用。联合天然药物可用于H.pylori感染的治疗及H.pylori感染甲硝唑耐药后的补救治疗措施。开发为新的抗H.pylori药物在城市或农村均可大力推广使用。对H.pylori相关疾病防治都有显著的社会效益和经济效益。(6)目前国内外未见臭灵丹对H.pylori的体内外抑菌实验报道；未见石榴皮、蒲公英对H.pylori甲硝唑耐药株的体内外抑菌实验报道。
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