目的：研究由两种冷冻保护剂乙二醇(Ethylene Glycol，EG)和二甲亚砜(dimethylsuphoxide，DMSO)单独或联合配伍的改良玻璃化溶液对小鼠囊胚超快速冷冻保存的效果；比较聚蔗糖(Ficoll 70)的添加对超快速冷冻的作用；初步确定囊胚冷冻保存最佳玻璃化溶液及玻璃化冷冻的最佳囊胚发育阶段；通过透射电镜观察找出囊胚冷冻损伤的超微结构改变。 方法：1、对6-8W龄昆明小白鼠促排卵，处死小鼠后获得小鼠初级囊胚和扩张囊胚。2、分别采用六组玻璃化溶液(ES35、EDS35、ESFIO、ESF20、EDSFIO和EDSF20)对小鼠初级囊胚和扩张囊胚进行玻璃化冷冻。3、透射电镜下观察新鲜扩张囊胚和各冷冻组冻融扩张囊胚的超微结构。 结果：1、对于初级囊胚的存活率和孵出率均是EDSFIO组最高，与新鲜对照组无显著性差异；ES35组最低与EDSFIO组和新鲜对照组之间均存在显著性差异；2、对于扩张囊胚存活率各实验组间均无显著性差异，与新鲜对照组均有显著性差异；对于扩张囊胚的孵出率ES35组最低，EDSFIO组最高，与新鲜对照组均存在显著差异。3、EG^DMSO对于囊胚的存活率和孵出率均有统计学意义。4、Ficoll 70对于初级囊胚的存活率有统计学意义，浓度为10％或20％时的存活率均显著高于浓度为0％时，浓度为10％时存活率高于20％时，但无统计学意义。5、除ES35组外各冷冻组，初级囊胚存活率显著高于扩张囊胚；EDS35组、ESF20组和EDSF20组的初级囊胚孵出率均显著高于扩张囊胚孵出率。6、透射电镜观察显示扩张囊胚冷冻损伤主要是细胞膜性结构和细胞骨架结构的损伤。 结论：1、DMSO的添加对于改善玻璃化溶液具有重要作用，尤其是有助于初级囊胚孵出率的提高。2、Fic011 70的添加对于提高初级囊胚的存活率具有统计学意义，Ficoll 70的浓度为10％时对于玻璃化溶液已足够。3、EDSF10是初级囊胚和扩张囊胚玻璃化冷冻保存的最佳玻璃化溶液。4、初级囊胚是囊胚玻璃化冷冻保存的最佳阶段。5、扩张囊胚冷冻损伤主要是细胞膜性结构和细胞骨架结构的损伤。
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