目的分析产KPC-2型碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant
Klebsiella pneumoniae，CRKP)的耐药及毒力特征。
方法收集2021年8月—2022年3月昆明某三甲医院临床分离的CRKP非重复菌株26株，采用质谱分析仪及VITEK 2 Compact系统对细菌进行鉴定及药敏试验，PCR方法扩增菌株携带的耐药及毒力基因，通过高毒力肺炎克雷伯菌特征性毒力基因将CRKP菌株分为高毒力CRKP(CR-hvKP)组和非高毒力CRKP(CR-non-hvKP)组，通过拉丝试验、血清抗性试验、铁载体定性定量试验探究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的毒力表型。采用Illumina高通量测序平台对CR-hvKP组CRKP-67和CR-non-hvKP组CRKP-94菌株进行全基因组测序，进一步分析菌株携带的耐药和毒力基因以及毒力质粒。结果药敏结果显示26株菌株均对碳青霉烯类、头孢菌素类、氟喹诺酮类以及β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物等抗生素耐药，对阿米卡星、复方新诺明和庆大霉素的耐药率为61.54%(16/26)、57.69%(15/26)和73.08%(19/26)。耐药基因扩增结果显示
blaKPC-2、
blaNDM-1、
blaOXA-48、
blaVIM、
blaIMP、
blaSME、
blaSHV、
blaCTX-M、
blaTEM等基因的携带率分别为100.00%(26/26)、0、0、0、0、100.00%(26/26)、100.00%(26/26)、15.38%(4/26)、73.08%(19/26)。在26株菌株中毒力基因
entB、
entC、
ureA、
uge、
wabG、
ycf、
irp1、
irp2、
mrkD、fimH、ybtS携带率均为100.00%(26/26)，毒力基因
kfuB、iroN、aero、magA、alls携带率均为0。拉丝试验显示CR-hvKP组(9株)阳性率为66.7%(6/9)，CR-non-hvKP组(17株)阳性率均为0；血清杀伤试验显示CR-hvKP组高敏感率为77.78%(7/9)，低敏感率为11.11%(1/9)，血清抗性率为11.11%(1/9)，而CR-non-hvKP组高敏感率为29.41%(5/17)，低敏感率为17.65%(3/17)，血清抗性率为52.94%(9/17)，两组差异无统计学意义(
P>0.05)；铁载体定性试验结果显示所有菌株均可产生黄色螯合圈，颜色深浅及大小稍不一致；铁载体定量试验结果表明CR-hvKP组铁载体平均产生量为40.74%，CR-non-hvKP组平均产生量为28.21%，CR-hvKP组高于CR-non-hvKP组，差异有统计学意义(
P<0.05)。全基因组测序结果显示CRKP-67为ST11型，含有3个质粒，其中质粒pCRKP-67-A携带一系列毒力基因，包括
iucABCD、iutA、rmpA、
rmpA2、
iroB和
peg344等。质粒pCRKP-67-B携带
blaKPC-2、
blaCTX-M、
blaSHV、
blaTEM等耐药基因，pCRKP-67-C携带
sul2、
tetR、
tetA等耐药基因，而CRKP-94为ST340型，含有1个耐药质粒pCRKP-94-A，携带
blaKPC-2、
blaCTX-M、
blaSHV、
blaTEM等耐药基因。
结论CRKP菌株耐药性强，仅对极少数抗生素还保持部分敏感活性，携带的耐药基因种类多，对碳青霉烯类抗生素耐药的主要耐药机制是携带
blaKPC-2基因，并且位于质粒上，造成碳青霉烯类耐药性的播散。CR-hvKP菌株携带的毒力基因种类及数量高于CR-non-hvKP菌株，耐药及毒力质粒共存于CR-hvKP菌株，可能造成高耐药性及高毒力共传播，应引起相关部门高度重视。
(8.0+极速模式)